Plasmide Double Nickase (h) RKIP: sc-401270-NIC

Le gène humain **PEBP1** code la **protéine inhibitrice de la kinase Raf (RKIP)**, un modulateur conservé de la transduction du signal qui freine la signalisation **RAF1–MEK–ERK** et peut également influencer d’autres réseaux de kinases impliqués dans la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. RKIP interagit aussi avec les voies des kinases associées aux **GPCR** et contribue à la régulation de la signalisation inflammatoire liée à **NF-κB** ainsi que de processus associés à l’apoptose. Par ces fonctions, RKIP aide à orienter les décisions cellulaires entre croissance et mort, avec des effets en aval sur la migration et les programmes de transition épithélio-mésenchymateuse. Une expression ou une activité altérée de **PEBP1/RKIP** a été associée à divers contextes pathologiques, notamment en oncologie et dans des mécanismes neuro-inflammatoires ou neurodégénératifs, ce qui en fait un nœud utile pour l’analyse des voies de signalisation.

RKIP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PEBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PEBP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PEBP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PEBP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.