Ring1b Plasmide Double Nickase (h): sc-404633-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ring1b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ring1b Double Nickase Plasmid (h) e il Ring1b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RING1B Antibody (N-32): sc-101109
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ring1b Plasmide Double Nickase (h) | sc-404633-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ring1b Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404633-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF2 codifica Ring1b, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger che costituisce il nucleo catalitico del complesso repressivo Polycomb 1 (PRC1). Ring1b monoubiquitina l’istone H2A in Lys119, rafforzando la compattazione della cromatina mediata da Polycomb e la repressione trascrizionale durante lo sviluppo e la specificazione di linea cellulare. In coordinamento con la metilazione di H3K27 dipendente da PRC2 e con altri regolatori epigenetici, RNF2 contribuisce a controllare i programmi del ciclo cellulare, gli stati di differenziamento e le risposte al danno al DNA. Un’attività deregolata di RNF2 e la segnalazione di PRC1 sono implicate nelle reti trascrizionali alterate osservate in molteplici tipi di tumore e in altri disturbi legati a una misregolazione epigenetica.
Ring1b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.