Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein S3: sc-402327-ACT

RPS3 codifica la proteína ribosomal S3, un componente conservado de la subunidad ribosomal pequeña 40S, necesaria para una iniciación y elongación de la traducción precisas, lo que sustenta la síntesis proteica global y el control del crecimiento celular. Más allá de su función ribosomal, se ha implicado a RPS3 en la regulación de respuestas al estrés y de la estabilidad genómica, incluidas interacciones con vías vinculadas al daño oxidativo y la reparación del ADN. La alteración de la biogénesis ribosomal y del control translacional puede contribuir a la transformación oncogénica y a cambios en el destino celular, lo que convierte a RPS3 en un nodo útil para estudiar la proteostasis, los programas de proliferación y la señalización adaptativa al estrés. La desregulación de proteínas ribosomales y de la vigilancia asociada al ribosoma se ha asociado con ribosomopatías y fenotipos relacionados con el cáncer, lo que respalda la investigación mecanística sobre cómo la perturbación de RPS3 remodela la salida del transcriptoma al proteoma.

Ribosomal Protein S3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein S3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein S3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein S3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein S3 en células tumorales con expresión de RPS3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.