Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein S14: sc-403429-ACT

RPS14 codifica la proteína ribosómica S14, un componente esencial de la subunidad ribosómica pequeña 40S que favorece una decodificación precisa del ARNm y el inicio de la síntesis de proteínas. A través de su papel en la biogénesis del ribosoma y el control de la traducción, RPS14 contribuye a la proteostasis y a la progresión del ciclo celular, lo que la vincula a programas de respuesta al estrés como la vigilancia nucleolar y los puntos de control asociados a p53. La alteración de la función de proteínas ribosómicas puede perturbar la traducción global y afectar de forma selectiva a transcritos implicados en el crecimiento y la diferenciación, lo que convierte a RPS14 en un nodo útil para estudiar ribosomopatías y fenotipos proliferativos. En sistemas experimentales, la desregulación de factores de ensamblaje ribosomal, incluido RPS14, se ha asociado con defectos hematopoyéticos y con una remodelación de la traducción relacionada con el cáncer.

Ribosomal Protein S14 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein S14 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein S14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein S14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein S14 en células tumorales con expresión de RPS14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.