Rfp2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-426099-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rfp2O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Rfp2 (m) e o Plasmídeo Double Nickase Rfp2 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Trim13. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rfp2 Anticorpo (A-2): sc-398129
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rfp2 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-426099-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Trim13 de camundongo codifica a proteína do tipo RING finger Rfp2, uma ligase de ubiquitina E3 que ajuda a regular o controle de qualidade proteica e a transdução de sinais ao promover a degradação, dependente de ubiquitina, de substratos específicos. A Rfp2 tem sido associada a processos relacionados ao retículo endoplasmático e a vias responsivas ao estresse, influenciando decisões celulares como sobrevivência, proliferação e sinalização imune inata. Ao moldar a proteostase e a abundância de receptores/adaptadores, a Trim13 pode impactar, de modo dependente do contexto, vias a jusante incluindo a NF-κB e outras redes inflamatórias. Alterações na atividade de ligases de ubiquitina da família TRIM têm sido associadas a desregulação imune e fenótipos relacionados ao câncer, tornando a Trim13 um ponto útil para estudos mecanísticos em modelos de camundongo e sistemas celulares.
Rfp2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Trim13 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Trim13. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Trim13. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Trim13 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.