RFLAT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404618

Übersicht

KLF13 kodiert den Transkriptionsfaktor RFLAT-1, ein Krüppel-ähnliches Zinkfingerprotein, das an GC-reiche Promotorelemente bindet und dadurch Genexpressionsprogramme moduliert, die die Lymphozytenaktivierung und entzündliche Signalwege steuern. RFLAT-1 wird mit der Regulation der Transkription von Chemokinen und Zytokinen in Verbindung gebracht und kann mit Signalwegen wie NF-κB-abhängigen Transkriptionsantworten interagieren, wodurch Differenzierung und Aktivierungszustände von Immunzellen geprägt werden. Eine fehlregulierte KLF13/RFLAT-1-Aktivität wurde in Zusammenhängen immunvermittelter Pathologien und veränderter inflammatorischer Gensignaturen untersucht sowie in transkriptionellen Netzwerken, die zu aberranter Proliferation und erhöhter Überlebensfähigkeit in krankheitsrelevanten Zelltypen beitragen. Diese Eigenschaften machen KLF13 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um reizabhängige transkriptionelle Regulation und Immun-Gen-Schaltkreise in humanen Modellsystemen zu analysieren.

Das RFLAT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KLF13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KLF13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KLF13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RFLAT-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KLF13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RFLAT-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KLF13-Exone abzielen, die für die RFLAT-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KLF13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RFLAT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RFLAT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KLF13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RFLAT-1 HDR-Plasmid (h) und RFLAT-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KLF13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KLF13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.