RCC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402078-ACT

RCC1 (regulador da condensação cromossómica 1) codifica um fator de troca de nucleótidos de guanina ligado à cromatina, que gera Ran-GTP nos cromossomas, estabelecendo o gradiente de Ran necessário para a montagem do fuso mitótico e a reformação do invólucro nuclear. Ao controlar o transporte nucleocitoplasmático dependente de Ran, o RCC1 coordena a progressão do ciclo celular, a condensação cromossómica e a organização nuclear pós-mitótica. A função do RCC1 cruza-se com programas de replicação do DNA e de estabilidade genómica através do seu acoplamento à dinâmica da cromatina e ao controlo mitótico. A atividade ou expressão desregulada de RCC1 tem sido associada a fenótipos proliferativos e a respostas alteradas de checkpoint, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos que sustentam o crescimento oncogénico e a aneuploidia.

RCC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RCC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RCC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RCC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RCC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RCC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RCC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RCC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RCC1 em células tumorais com expressão de RCC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.