Plásmido CRISPR de Activación (h) RBFOX3/NeuN: sc-402976-ACT

RBFOX3, también conocido como NeuN, codifica una proteína de unión a ARN enriquecida en neuronas que reconoce motivos UGCAUG para regular programas de empalme alternativo esenciales para la diferenciación neuronal, la maduración sináptica y el mantenimiento de la identidad neuronal. Mediante el control de la inclusión de exones y del equilibrio de isoformas de ARNm, RBFOX3 se integra en redes postranscripcionales que moldean la dinámica del citoesqueleto, el crecimiento de neuritas y la expresión génica dependiente de la actividad. El empalme dirigido por la familia RBFOX se ha vinculado a vías que gobiernan el equilibrio excitatorio/inhibitorio y la conectividad neuronal, lo que convierte a RBFOX3 en un marcador y regulador de uso muy extendido en estudios del desarrollo y la función neural. Los programas de empalme neuronal desregulados que implican factores RBFOX se han asociado con mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, lo que respalda su relevancia para modelar defectos de procesamiento de ARN en sistemas humanos.

RBFOX3/NeuN El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RBFOX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RBFOX3/NeuN El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RBFOX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RBFOX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RBFOX3/NeuN. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RBFOX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RBFOX3/NeuN en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RBFOX3/NeuN en células tumorales con expresión de RBFOX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.