RASAL1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422603

Panoramica

Rasal1 codifica RASAL1, una proteina attivatrice della GTPasi Ras che accelera la conversione di Ras-GTP attivo in Ras-GDP inattivo, limitando così la segnalazione guidata da Ras. Modulando l’attività delle vie a valle RAF–MEK–ERK e PI3K–AKT, RASAL1 influenza programmi di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento cellulare, inclusi effetti dipendenti dal contesto sui fenotipi epiteliali e mesenchimali. Alterazioni della funzione o dell’espressione di RASAL1 sono state associate a una deregolazione del controllo della crescita e al rimodellamento fibrotico in diversi tessuti, a supporto della sua rilevanza per studi sull’omeostasi della segnalazione e sulla riprogrammazione cellulare associata a malattia in modelli murini. Queste proprietà rendono Rasal1 un nodo utile per analizzare i feedback della via di Ras e il cross-talk con reti regolatorie trascrizionali e della matrice extracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RASAL1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rasal1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rasal1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rasal1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RASAL1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rasal1 per lo studio della segnalazione di RASAL1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rasal1 critici per la funzione di RASAL1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rasal1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RASAL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RASAL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rasal1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RASAL1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RASAL1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rasal1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rasal1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.