Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ran BP-2 (m): sc-422596

Présentation

Ranbp2 code pour Ran BP-2 (Nup358), un composant majeur des filaments cytoplasmiques du complexe du pore nucléaire, qui coordonne le transport nucléocytoplasmique dépendant de la GTPase Ran et contribue à l’homéostasie de l’enveloppe nucléaire. En tant que ligase E3 de la SUMO, il régule la SUMOylation de certains cargos et participe à des processus tels que la progression mitotique, la dynamique des microtubules et la protéostase. Ran BP-2 intervient également dans des voies contrôlant l’export des ARNm et les réponses au stress, reliant le transport nucléaire au contrôle du cycle cellulaire et à l’adaptation cellulaire. La dérégulation du trafic nucléocytoplasmique et de la régulation dépendante de la SUMO a été associée à des phénotypes neurodégénératifs et à une altération de la signalisation immunitaire, faisant de Ranbp2 un nœud utile pour des études mécanistiques dans des systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ran BP-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ranbp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ranbp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ranbp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ran BP-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ranbp2 pour l'étude de la signalisation de Ran BP-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ranbp2 essentiels à la fonction de Ran BP-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ranbp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ran BP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ran BP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ranbp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ran BP-2 plasmide HDR (m) et le Ran BP-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ranbp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ranbp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.