Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Rad54 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401750
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rad54 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Rad54, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rad54 Antibody (F-11): sc-374598
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rad54 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401750 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RAD54L codifica l’ATPasi umana Rad54 dipendente dal DNA, un rimodellatore della cromatina della famiglia SWI2/SNF2 che coopera con RAD51 per promuovere la ricombinazione omologa. Rad54 stabilizza e rimodella i filamenti presinaptici di RAD51, stimola l’invasione del filamento e supporta la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA durante lo stress replicativo, contribuendo all’integrità del genoma e alla competenza dei checkpoint del ciclo cellulare. La proteina agisce all’interno delle reti della ricombinazione omologa e della risposta al danno al DNA, interagendo con fattori chiave della riparazione per regolare la processazione degli intermedi di ricombinazione. Un’attività alterata di RAD54L è rilevante per fenotipi di instabilità cromosomica frequentemente studiati nella biologia del cancro e in modelli di riparazione del DNA difettosa.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rad54 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAD54L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAD54L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAD54L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rad54.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAD54L per lo studio della segnalazione di Rad54, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RAD54L critici per la funzione di Rad54
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAD54L per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Rad54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rad54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAD54L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Rad54 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rad54 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAD54L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAD54L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.