Rad21 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402348-LAC

Il gene umano **RAD21** codifica Rad21, una subunità kleisina fondamentale del complesso della coesina, che tiene unite le cromatidi sorelle e organizza l’architettura della cromatina di ordine superiore. Rad21 è necessaria per una corretta segregazione dei cromosomi, per la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e per la regolazione dell’espressione genica attraverso la comunicazione enhancer–promoter e i confini dei domini di associazione topologica (TAD). Grazie al coordinamento della coesina con CTCF e con fattori di replicazione/riparazione, **RAD21** influenza la progressione del ciclo cellulare e le vie della stabilità genomica. Alterazioni del dosaggio di **RAD21** o della funzione della coesina sono collegate alle coesinopatie e, nella ricerca in biologia del cancro, sono state associate a programmi trascrizionali modificati e a instabilità cromosomica.

Le particelle di attivazione lentivirale Rad21 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RAD21 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Rad21 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RAD21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Rad21. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RAD21 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.