Rab 7 Lentiviral Activation Particles (m): sc-422571-LAC

Rab7 kodiert Rab 7, eine kleine GTPase, die die Reifung später Endosomen, den Endosom–Lysosom-Transport sowie den lysosomalen Abbau reguliert, indem sie koordinert Effektor-Komplexe rekrutiert, die an Vesikel-Anheftung und -Fusion beteiligt sind. In Maus-Zellen ist die Rab-7-Aktivität mit Autophagie- und Lysosomen-Biogenesewegen verknüpft und beeinflusst dadurch den Umsatz von Fracht, die Herunterregulierung von Rezeptoren und den Umbau von Membranen. Eine fehlregulierte Rab7-abhängige Transportdynamik kann die Proteostase und die Qualitätskontrolle von Organellen stören – Prozesse, die für Neurodegeneration, Infektionsbiologie und den Stoffwechsel von Krebszellen relevant sind. Als zentraler Knotenpunkt im endolysosomalen Netzwerk wird Rab 7 häufig eingesetzt, um endozytischen Fluss, die Fusion von Autophagosomen mit Lysosomen und den intrazellulären Transport von Pathogenen zu untersuchen.

Rab 7 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Rab7-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Rab 7 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Rab7-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Rab 7-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Rab7-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.