Plásmido Doble Nickase (h) PXR: sc-400824-NIC

NR1I2 codifica el receptor X de pregnanos (PXR), un receptor nuclear activado por ligando que funciona como sensor de xenobióticos y vincula la exposición a sustancias químicas con el control transcripcional de programas de desintoxicación. Tras su activación, PXR forma un heterodímero con RXR y se une a elementos de respuesta para regular genes implicados en el metabolismo y el transporte de fase I/II, incluidos CYP3A, las UGT y los transportadores ABC, integrándose con las vías de señalización de ácidos biliares, lípidos e inflamación. Esta red reguladora influye en la homeostasis hepática e intestinal y modula las respuestas celulares a fármacos y sustancias químicas ambientales. La desregulación de la señalización de PXR se ha asociado con variabilidad en el metabolismo e interacciones de fármacos, fenotipos colestásicos y metabólicos, y efectos dependientes del contexto en afecciones asociadas a inflamación y en la biología del cáncer.

PXR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NR1I2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NR1I2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NR1I2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NR1I2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.