Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSR: sc-401718-ACT

JMJD6 humain, également appelé PSR, code une enzyme contenant un domaine Jumonji C (JmjC) impliquée dans la régulation épigénétique et dans des mécanismes associés à l’ARN de l’expression génique. Il a été rapporté que JMJD6 catalyse l’hydroxylation et la déméthylation de substrats protéiques, et qu’il intervient dans l’élongation transcriptionnelle et l’épissage du pré-ARNm via des interactions avec BRD4 et des facteurs du spliceosome. Par ces activités, PSR contribue au contrôle de programmes de développement associés à la chromatine, à la progression du cycle cellulaire et à des réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Une expression ou une activité dérégulée de JMJD6 a été associée à des états transcriptionnels altérés observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation de la chromatine et du traitement de l’ARN.

PSR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JMJD6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JMJD6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JMJD6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JMJD6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSR dans les cellules tumorales présentant une expression de JMJD6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.