Particules Lentivirales d'Activation (h) Prohibitin: sc-416271-LAC

PHB code la prohibitine, une protéine d’échafaudage hautement conservée, enrichie dans les mitochondries et d’autres compartiments membranaires, qui contribue à réguler la biogenèse mitochondriale, l’organisation de la membrane interne et la protéostasie grâce à des fonctions de type chaperon. La prohibitine participe au contrôle de la progression du cycle cellulaire et de l’apoptose et s’interface avec des réseaux de signalisation tels que MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant des programmes transcriptionnels et des réponses au stress. Une expression ou une localisation de PHB altérée a été associée à une perturbation de la phosphorylation oxydative, à une augmentation des espèces réactives de l’oxygène (ROS) avec des défauts de leur prise en charge, ainsi qu’à des modifications des états épithélio-mésenchymateux et prolifératifs. Ces propriétés font de PHB un nœud largement étudié du contrôle qualité mitochondrial, de la régulation du destin cellulaire et du remodelage métabolique associé aux maladies dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Prohibitin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PHB dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Prohibitin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PHB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Prohibitin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PHB ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.