PRIC285 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406441-ACT

HELZ2 umano (noto anche come PRIC285) codifica un coattivatore trascrizionale di tipo elicasi che integra segnali provenienti dai recettori nucleari per gli ormoni e da altri fattori di trascrizione, modulando l’espressione genica dipendente dalla RNA polimerasi II. PRIC285 è stato associato alla regolazione dei programmi di metabolismo lipidico e del glucosio attraverso interazioni con vie di segnalazione quali quella di PPAR, influenzando l’omeostasi energetica cellulare e il tono infiammatorio. Modellando gli output trascrizionali in epatociti, adipociti e in contesti rilevanti per il sistema immunitario, l’attività di HELZ2 è studiata per il suo contributo alla disregolazione metabolica e a fenotipi complessi di malattia correlati. La sua funzione di coattivatore nucleare lo rende inoltre utile per analizzare il controllo cromatina-dipendente di reti geniche inducibili e della trascrizione responsiva allo stress.

PRIC285 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HELZ2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRIC285 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HELZ2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HELZ2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRIC285. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HELZ2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRIC285 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRIC285 nelle cellule tumorali con espressione di HELZ2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.