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PRAME慢病毒激活颗粒(h) | sc-404682-LAC | 200 µl | $455.00 |
PRAME(黑色素瘤中优先表达的抗原)编码一种癌睾抗原,主要作为转录调控因子发挥作用,其最典型的特征是作为视黄酸受体信号通路的强效抑制因子。通过调控依赖视黄类化合物的基因表达程序,PRAME 可影响细胞分化、增殖与生存等通路,包括在视黄酸通常促进成熟或抑制生长的情境中。多种肿瘤类型中均有 PRAME 异常表达的报道,并且它常被用作研究肿瘤免疫生物学与抗原呈递的分子标志物。在正常组织中,PRAME 的表达通常受到严格限制,因此是研究表观遗传调控与谱系特异性转录控制的一个有用模型。
PRAME 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 PRAME 表达。
PRAME 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在PRAME转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性PRAME表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 PRAME 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。