PP2Cκ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433975

Panoramica

Il gene murino **Ppm1k** codifica la fosfatasi proteica mitocondriale **PP2Cκ**, una fosfatasi serina/treonina **Mg2+/Mn2+-dipendente** che regola il catabolismo degli amminoacidi a catena ramificata (BCAA) defosforilando il complesso della **deidrogenasi degli α-chetoacidi a catena ramificata (BCKDH)**. Attraverso il controllo dell’attività di BCKDH, PP2Cκ influenza il flusso mitocondriale dei nutrienti, l’omeostasi energetica e la segnalazione metabolica legata alla disponibilità di amminoacidi. Un’alterazione della funzione di Ppm1k è stata associata a livelli anomali di BCAA e a stress metabolico mitocondriale, rendendolo rilevante per studi sugli errori congeniti del metabolismo e su fenotipi metabolici più ampi in cui la gestione dei BCAA risulta perturbata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2Cκ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppm1k in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppm1k insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppm1k a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2Cκ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppm1k per lo studio della segnalazione di PP2Cκ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppm1k critici per la funzione di PP2Cκ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppm1k per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PP2Cκ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2Cκ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppm1k. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PP2Cκ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2Cκ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppm1k per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppm1k definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.