PML Double Nickase Plasmid (h): sc-400145-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PML Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PML Double-Nickase-Plasmid (h) und PML Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PML abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PML: sc-377390
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PML Double Nickase Plasmid (h) | sc-400145-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PML Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400145-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Promyelozytenleukämie-Protein (PML) ist ein Gerüstprotein der TRIM-Familie, das die Bildung von PML-Kernkörperchen (PML nuclear bodies) initiiert und dadurch Proteine organisiert, die an Transkriptionsregulation, DNA-Schadensantworten, Seneszenz, Apoptose und der intrinsischen antiviralen Abwehr beteiligt sind. PML wird durch posttranslationale Modifikationen reguliert, darunter die SUMOylierung, die den Aufbau der Kernkörperchen sowie die Rekrutierung von Partnern wie p53- und ATR/CHK-assoziierten Faktoren unter genotoxischem Stress steuert. Über diese Knotenpunkte beeinflusst PML den Chromatinzustand, Programme interferon-stimulierter Gene und Signalwege der Genomstabilität, die zelluläre Schicksalsentscheidungen mitbestimmen. Eine Fehlregulation von PML wurde mit veränderter Stresssignalgebung und Kontexten maligner Transformation in Verbindung gebracht, einschließlich leukämierelevanter Mechanismen, bei denen Kernkörperchen gestört werden.
PML Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PML-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PML abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PML-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PML-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.