Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Pitx2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401426-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Pitx2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Pitx2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Pitx2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PITX2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Pitx2: sc-390457
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Pitx2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401426-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pitx2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401426-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PITX2 kodiert Pitx2, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Embryogenese und in der adulten Homöostase Zellschicksalsentscheidungen und die Gewebemusterbildung reguliert. Pitx2 wirkt downstream des Wnt/β‑Catenin-Signalwegs und ist mit TGF‑β- sowie Retinsäure-abhängigen Transkriptionsprogrammen verknüpft, um Proliferation, Differenzierung und morphogenetische Prozesse zu steuern. In der Humanbiologie wurden veränderte PITX2-Expression oder regulatorische Varianten mit Entwicklungsstörungen der okulären und kraniofazialen Strukturen sowie mit fehlregulierten Transkriptionsnetzwerken in Kontexten von Krebs und der kardialen Elektrophysiologie in Verbindung gebracht. Diese Signalweg-Verknüpfungen machen PITX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise, der Linienspezifikation und der kontextabhängigen Transkriptionskontrolle.
Pitx2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PITX2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PITX2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PITX2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PITX2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.