Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PITSLRE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419583
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PITSLRE Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PITSLRE, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PITSLRE Antibody (B-9): sc-377296
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PITSLRE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419583 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Cdk11b codifica la chinasi serina/treonina PITSLRE, un membro della famiglia delle chinasi ciclina-dipendenti implicato nel coordinare la progressione del ciclo cellulare con i programmi di trascrizione e di processamento dell’RNA. L’attività di PITSLRE è stata collegata alla regolazione dello splicing del pre-mRNA, al controllo mitotico e all’apoptosi, contribuendo alla proteostasi e all’integrità del genoma nelle cellule in proliferazione. L’alterazione delle vie associate a PITSLRE può modificare le risposte dei checkpoint e la segnalazione da stress, processi frequentemente studiati in modelli di proliferazione deregolata e di omeostasi tissutale. In quanto nodo di collegamento tra la segnalazione chinasi e il macchinario nucleare dell’espressione genica, Cdk11b è rilevante per indagini meccanicistiche sul controllo della crescita e su fenotipi cellulari associati a malattie in sistemi murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PITSLRE (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdk11b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdk11b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdk11b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PITSLRE.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdk11b per lo studio della segnalazione di PITSLRE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Cdk11b critici per la funzione di PITSLRE
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdk11b per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PITSLRE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PITSLRE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdk11b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PITSLRE Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PITSLRE (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdk11b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdk11b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.