Particules Lentivirales d'Activation (h) PINK1: sc-400739-LAC

PINK1 (PTEN-induced kinase 1) code une kinase sérine/thréonine ciblée vers les mitochondries, capable de détecter la dépolarisation mitochondriale et de déclencher des programmes de contrôle qualité. En situation de stress mitochondrial, PINK1 s’accumule sur la membrane externe des mitochondries et active la mitophagie dépendante de PRKN/Parkin, en coordonnant la signalisation par l’ubiquitine, le recrutement des autophagosomes et l’élimination des organites endommagés. PINK1 influence également la dynamique mitochondriale, l’homéostasie de la phosphorylation oxydative, la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les réponses innées au stress. La perturbation des voies régulées par PINK1 est fortement associée à la neurodégénérescence, en particulier à la maladie de Parkinson autosomique récessive à début précoce, et est étudiée dans le contexte de la dysfonction mitochondriale et de la défaillance de la protéostasie.

Les particules d'activation lentivirales PINK1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PINK1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PINK1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PINK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PINK1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PINK1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.