PIEZO2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-412957-LAC

PIEZO2 codifica um canal catiônico não seletivo ativado mecanicamente, que converte a tensão da membrana em um rápido influxo de Ca2+, moldando a mecanotransdução em neurônios sensoriais e em outros tipos celulares mecanossensíveis. A atividade de PIEZO2 acopla estímulos físicos a sinalização a jusante dependente de cálcio, influenciando a excitabilidade neuronal, a remodelação do citoesqueleto e respostas transcricionais ligadas às vias de tato e propriocepção. Variações genéticas ou a desregulação da função de PIEZO2 têm sido associadas a alterações no processamento somatossensorial e a fenótipos neuromusculares, tornando-o um alvo amplamente estudado em biologia sensorial e mecanobiologia. In vitro, o PIEZO2 é comumente investigado em modelos de correntes evocadas mecanicamente, dinâmica de sinalização de cálcio e programas de expressão gênica mecanossensíveis.

As Partículas de Ativação Lentivirais PIEZO2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PIEZO2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PIEZO2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PIEZO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PIEZO2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PIEZO2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.