PIEZO2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412957-ACT

PIEZO2 codifica um canal catiônico não seletivo, ativado mecanicamente, que converte a tensão de membrana e o estresse de cisalhamento em correntes iônicas permeáveis ao cálcio. É um componente central da mecanotransdução em neurônios sensoriais e em outras células mecanossensíveis, influenciando a excitabilidade de membrana, a sinalização de cálcio e programas transcricionais a jusante dependentes de atividade. A atividade de PIEZO2 se conecta a vias que controlam a sinalização de tato e propriocepção, a função de neuritos e a dinâmica do citoesqueleto por meio do fluxo iônico mediado por canais mecanossensíveis. Alterações genéticas e funcionais de PIEZO2 têm sido associadas a fenótipos sensoriais e neuromusculares em humanos, tornando-o um locus útil para estudar o acoplamento mecanoelétrico e a biologia de circuitos mecanossensoriais.

PIEZO2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIEZO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIEZO2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIEZO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIEZO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIEZO2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIEZO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIEZO2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIEZO2 em células tumorais com expressão de PIEZO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.