Plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASy (h): sc-403125

Présentation

PIAS4 code pour PIASy, une ligase E3 de SUMO qui module la SUMOylation des protéines afin d’ajuster finement les programmes transcriptionnels, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation immunitaire innée. PIASy régule l’activité, la localisation et la stabilité de divers facteurs de transcription et intermédiaires de signalisation, reliant le contrôle dépendant de la SUMO à des voies telles que NF-κB, les réponses aux interférons et les réseaux activés par le stress. Par ces mécanismes, PIASy influence la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et des processus associés à la chromatine, fréquemment perturbés dans la biologie des maladies. Une altération de la fonction PIAS4/PIASy a été étudiée dans le contexte de la signalisation oncogénique, de la régulation de l’inflammation et de phénotypes de maintenance du génome pertinents pour la tumorigenèse et des modèles de transformation cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASy (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PIAS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PIAS4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PIAS4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PIASy.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PIAS4 pour l'étude de la signalisation de PIASy, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PIAS4 essentiels à la fonction de PIASy
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PIAS4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PIASy plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PIASy plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PIAS4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PIASy plasmide HDR (h) et le PIASy (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PIAS4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PIAS4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.