Plasmide CRISPR d'Activation (h) PI 3-kinase p85β: sc-401991-ACT

PIK3R2 code la sous-unité régulatrice p85β de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) de classe IA, un médiateur central de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et de la voie insuline/IGF. En stabilisant et en modulant les isoformes catalytiques p110, la PI3-kinase p85β contribue à contrôler la production de PIP3 et l’activité en aval de la voie AKT–mTOR, influençant la croissance cellulaire, la survie, le métabolisme et la dynamique du cytosquelette. Une régulation altérée de la voie PI3K est largement impliquée dans la biologie du cancer, le neurodéveloppement et la signalisation immunitaire, ce qui fait de PIK3R2 un nœud clé pour analyser les rétrocontrôles de la voie et l’amplitude du signal. L’expression de PIK3R2 et ses interactions régulatrices sont également pertinentes pour des études portant sur la sensibilité à l’insuline, la migration et la signalisation de réponse au stress dans les cellules humaines.

PI 3-kinase p85β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIK3R2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PI 3-kinase p85β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIK3R2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIK3R2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PI 3-kinase p85β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIK3R2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PI 3-kinase p85β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PI 3-kinase p85β dans les cellules tumorales présentant une expression de PIK3R2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.