PI 3-kinase p110γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401043

Descripción general

PIK3CG codifica la subunidad catalítica p110γ de la fosfoinosítido 3-quinasa de clase IB, un mediador clave de la señalización de fosfoinosítidos impulsada por receptores acoplados a proteína G (GPCR) en células hematopoyéticas y otros tipos celulares. La PI 3-quinasa p110γ fosforila lípidos de fosfatidilinositol para generar PIP3, promoviendo programas de supervivencia dependientes de AKT, la remodelación del citoesqueleto y la quimiotaxis dirigida a través de efectores posteriores como PDK1, mTOR y reguladores de pequeñas GTPasas. Esta vía integra señales de receptores de quimiocinas, receptores del complemento y mediadores inflamatorios para controlar la activación leucocitaria, la migración y el estallido oxidativo. La señalización desregulada de PIK3CG se ha implicado en respuestas inflamatorias aberrantes y disfunción de células inmunitarias, y también se estudia en el contexto de las interacciones tumor–inmunidad y la señalización del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p110γ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PIK3CG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PIK3CG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PIK3CG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PI 3-kinase p110γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PIK3CG para la investigación de la señalización de PI 3-kinase p110γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PIK3CG críticos para la función de PI 3-kinase p110γ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PIK3CG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PIK3CG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PI 3-kinase p110γ (h) y el plásmido HDR PI 3-kinase p110γ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PIK3CG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PIK3CG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.