Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGRMC2: sc-405132-ACT

Le composant membranaire 2 du récepteur de la progestérone (PGRMC2) est une protéine membranaire associée aux membranes qui se lie à l’hème et qui est impliquée dans le métabolisme des stérols, le trafic membranaire et la régulation des réactions oxydatives dépendantes du cytochrome P450. Dans les cellules humaines, PGRMC2 a été associé à la gestion intracellulaire du cholestérol et à des processus liés au réticulum endoplasmique qui façonnent l’homéostasie lipidique et les réponses au stress cellulaire. Son activité recoupe des voies qui gouvernent la fonction mitochondriale et du réticulum endoplasmique, l’équilibre redox et l’organisation des complexes protéiques, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la reprogrammation métabolique. Une expression ou une signalisation altérées de PGRMC2 ont été associées à des phénotypes observés en biologie du cancer, en régulation endocrinienne et dans des états inflammatoires, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud mécanistique dans des modèles pertinents pour les maladies.

PGRMC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PGRMC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGRMC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PGRMC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PGRMC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGRMC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PGRMC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGRMC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGRMC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PGRMC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.