Plásmido Doble Nickase (h) PGRMC1: sc-401945-NIC

El componente 1 del receptor de progesterona asociado a membrana (PGRMC1) es una proteína asociada a membrana que se une al grupo hemo e implica en la señalización no clásica de la progesterona, el metabolismo de esteroles y la regulación de la actividad de enzimas del citocromo P450. Se localiza predominantemente en el retículo endoplásmico y otros compartimentos membranosos, donde influye en la homeostasis lipídica, el tráfico vesicular y las respuestas celulares al estrés, incluidas vías vinculadas a la proliferación y la supervivencia. PGRMC1 se ha relacionado con la biología reproductiva y la regulación metabólica, y se han descrito patrones de expresión alterados en múltiples contextos de enfermedad, incluida la biología del cáncer y procesos neurodegenerativos. Estas características hacen de PGRMC1 una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización de progesterona en membrana, la biología redox/del hemo y las redes metabólicas centradas en P450.

PGRMC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PGRMC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PGRMC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PGRMC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PGRMC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.