Plásmido CRISPR de Activación (h) PGF2αR: sc-402974-ACT

PTGFR codifica el receptor de prostaglandina F2α (PGF2αR), un GPCR tipo rodopsina que se une a PGF2α para iniciar la señalización dependiente de Gq/11, elevando el calcio intracelular y activando la fosfolipasa C, la PKC y las vías MAPK aguas abajo. A través de estas cascadas, PGF2αR regula la contractilidad del músculo liso, el tono vascular y respuestas inflamatorias dependientes del contexto, vinculando la biología de los prostanoides con programas de remodelación tisular. La alteración de la señalización de PTGFR se ha estudiado en fisiología reproductiva, regulación de la presión ocular y señales del microambiente asociadas al cáncer, donde la señalización impulsada por prostaglandinas puede influir en la proliferación, la migración y la dinámica de la matriz extracelular. Como receptor de membrana que integra señales de eicosanoides, PGF2αR constituye un nodo abordable para investigar salidas transcripcionales y fenotípicas mediadas por GPCR.

PGF2αR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTGFR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGF2αR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTGFR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTGFR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGF2αR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTGFR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGF2αR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGF2αR en células tumorales con expresión de PTGFR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.