Plásmido CRISPR de Activación (h) PDK4: sc-401355-ACT

El gen humano **PDK4** codifica la **quinasa 4 de la piruvato deshidrogenasa**, una quinasa mitocondrial que fosforila e inhibe el complejo piruvato deshidrogenasa para limitar la entrada de piruvato en el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) y promover un cambio metabólico hacia la oxidación de ácidos grasos. Su expresión se regula de manera dinámica por el ayuno, los glucocorticoides y la señalización de PPAR, integrando la detección de nutrientes con la bioenergética mitocondrial y el equilibrio redox celular. Al modular el flujo glucolítico frente al metabolismo oxidativo, PDK4 influye en la respuesta a la insulina y en el manejo de lípidos en tejidos metabólicamente activos. La actividad de PDK4 y el control transcripcional desregulados se han vinculado con fenotipos de estrés metabólico y se estudian con frecuencia en contextos como la resistencia a la insulina, la esteatosis y la reprogramación metabólica alterada de células tumorales.

PDK4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDK4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PDK4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDK4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDK4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PDK4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDK4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PDK4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PDK4 en células tumorales con expresión de PDK4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.