Partículas Lentivirales de Activación (h) PDE7B: sc-411961-LAC

La PDE7B humana codifica la fosfodiesterasa 7B, una enzima específica de AMPc que hidroliza el AMPc cíclico a 5′-AMP y, de este modo, modula la amplitud y la duración de la señalización dependiente de PKA y EPAC. Al controlar los reservorios intracelulares de AMPc, PDE7B influye en programas transcripcionales, la supervivencia celular y la diferenciación en contextos del sistema inmunitario y del sistema nervioso, interactuando con redes de señalización impulsadas por GPCR. Se han estudiado alteraciones en la expresión o la actividad de PDE7B en relación con la señalización inflamatoria, la neurotransmisión y la biología de enfermedades hematológicas y neurológicas, donde la homeostasis del AMPc constituye un nodo regulador clave. Por ello, PDE7B sirve como una herramienta genética útil para desentrañar la señalización de segundos mensajeros y el entrecruzamiento de vías en modelos celulares mecanísticos.

Las partículas de activación lentiviral PDE7B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PDE7B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PDE7B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PDE7B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PDE7B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PDE7B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.