Plasmide CRISPR d'Activation (h) PCAF: sc-400753-ACT

KAT2B code pour PCAF, une histone acétyltransférase de la famille GNAT qui acétyle les histones ainsi que des substrats non histoniques afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle. PCAF agit au sein de complexes coactivateurs multiprotéiques et interagit avec des facteurs de transcription pour réguler des processus tels que la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes de différenciation. Par un contrôle de l’expression génique dépendant de l’acétylation, KAT2B/PCAF contribue à des voies associées à la signalisation inflammatoire et à des réseaux transcriptionnels oncogéniques. Une activité ou une expression dérégulée de PCAF a été associée à des états épigénétiques altérés observés dans de multiples contextes de cancer, ainsi que dans d’autres maladies impliquant un déséquilibre transcriptionnel.

PCAF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KAT2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PCAF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KAT2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KAT2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PCAF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KAT2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PCAF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PCAF dans les cellules tumorales présentant une expression de KAT2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.