Pax-8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401757

Descripción general

PAX8 codifica Pax-8, un factor de transcripción de tipo “paired box” que regula la especificación de linaje y la organogénesis, con funciones destacadas en el desarrollo de los folículos tiroideos y en la diferenciación epitelial en el riñón y el sistema mülleriano. Pax-8 se une a motivos de ADN específicos de secuencia para coordinar programas transcripcionales que controlan la identidad celular, la proliferación y la supervivencia, y coopera con otros reguladores transcripcionales para modelar la cromatina y las redes de expresión génica. En tejidos adultos, PAX8 ayuda a mantener estados diferenciados, y la expresión desregulada o los reordenamientos se han asociado con un control transcripcional alterado en varias neoplasias epiteliales, lo que lo convierte en un marcador frecuente en estudios del origen tumoral. Estas funciones sitúan a PAX8 como un nodo útil para investigar circuitos reguladores génicos del desarrollo, la plasticidad epitelial y las firmas de trazado de linaje en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pax-8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PAX8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PAX8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PAX8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pax-8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PAX8 para la investigación de la señalización de Pax-8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PAX8 críticos para la función de Pax-8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PAX8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pax-8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pax-8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PAX8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pax-8 (h) y el plásmido HDR Pax-8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PAX8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PAX8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.