Pax-6 Lentiviral Activation Particles (h): sc-418357-LAC

PAX6 kodiert Pax-6, einen Paired-Box/Homeobox-Transkriptionsfaktor, der als Masterregulator der Spezifizierung okulärer, neuronaler und pankreatischer Zelllinien fungiert. Pax-6 koordiniert Genprogramme, die die Aufrechterhaltung von Vorläuferzellen, die Festlegung des Zellschicksals und die Gewebemorphogenese steuern, indem es an cis-regulatorische Elemente bindet und in entwicklungsbiologische Signalnetzwerke integriert. Eine dysregulierte PAX6-Aktivität stört die transkriptionellen Schaltkreise, die der Augen- und Gehirnentwicklung zugrunde liegen, und verändert endokrine Differenzierungsprogramme, die für die Biologie der pankreatischen Langerhans-Inseln relevant sind. Als dosisempfindlicher Regulator wird PAX6 häufig als molekulares Werkzeug genutzt, um entwicklungsbiologische Genregulationsnetzwerke und die Hierarchie von Transkriptionsfaktoren in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Pax-6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PAX6-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pax-6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PAX6-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pax-6-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PAX6-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.