Pax-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418357-ACT

PAX6 codifica Pax-6, um fator de transcrição do tipo paired box/homeobox que atua como regulador-mestre da especificação de linhagens neuroectodérmicas e oculares. Ao se ligar a elementos cis-regulatórios e coordenar redes transcricionais com outros reguladores do desenvolvimento, Pax-6 ajuda a controlar decisões de destino celular, a proliferação de progenitores e programas de diferenciação no olho, no prosencéfalo e nos compartimentos das ilhotas pancreáticas. A atividade de PAX6 faz interface com vias de sinalização mais amplas do desenvolvimento, incluindo WNT, SHH e circuitos de regulação gênica associados a TGF-β, para estabelecer o padrão espacial e a morfogênese tecidual. A desregulação da expressão ou da dosagem de PAX6 está associada a malformações oculares congênitas e fenótipos do neurodesenvolvimento, o que o torna um alvo amplamente utilizado para modelar o controle transcricional em sistemas humanos.

Pax-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAX6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAX6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAX6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAX6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-6 em células tumorais com expressão de PAX6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.