Particules Lentivirales d'Activation (h) p53: sc-416469-LAC

Le gène humain **TP53** code **p53**, un facteur de transcription spécifique de séquence qui intègre la détection des dommages à l’ADN, le stress oncogénique et d’autres agressions cellulaires afin de coordonner l’arrêt du cycle cellulaire, l’apoptose, la sénescence et la réparation de l’ADN. p53 pilote les principales voies de contrôle des points de contrôle (checkpoints) via la régulation transcriptionnelle de cibles telles que **CDKN1A (p21)**, **BAX**, **PUMA** et **GADD45**, et fait l’objet d’une régulation étroite par une dégradation médiée par l’ubiquitine via **MDM2/MDM4**. Elle s’interface également avec les programmes **PI3K–AKT**, **MAPK** et de stress métabolique pour préserver la stabilité du génome et limiter la propagation de cellules endommagées. La dérégulation de la signalisation de TP53 par mutation, altération du nombre de copies ou inhibition au niveau de la voie est une caractéristique centrale de la biologie tumorale et fait l’objet de nombreuses études portant sur les mécanismes d’instabilité génomique, les phénotypes de réponse aux traitements dans des systèmes modèles et les décisions de destin cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales p53 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TP53 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales p53 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TP53, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de p53. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TP53 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.