p41-ARCb Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419207-ACT

Arpc1b codifica a p41-ARCb, uma subunidade do complexo ARP2/3 que promove a nucleação e o ramificamento de actina, necessários para a remodelação dinâmica do citoesqueleto em células de camundongo. Ao sustentar a formação de lamelipódios, a endocitose e o tráfego vesicular, a p41-ARCb contribui para processos como migração de células imunes, fagocitose e sinalização dependente de adesão. Redes de actina impulsionadas pelo ARP2/3 interagem com vias de GTPases da família Rho e com reguladores a jusante da polaridade e motilidade celular. A desregulação da montagem de actina associada à ARPC1B está ligada a alterações da função imune e a fenótipos inflamatórios, tornando-a relevante para estudar as contribuições do citoesqueleto na defesa do hospedeiro e na homeostase tecidual.

p41-ARCb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Arpc1b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p41-ARCb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Arpc1b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Arpc1b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p41-ARCb. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Arpc1b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p41-ARCb no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p41-ARCb em células tumorais com expressão de Arpc1b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.