非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
p35 抗体 (B-1): sc-518009. 未转染 (A) 和小鼠 p35 转染 (B) HEK293T 全细胞裂解液中 p35 表达的 Western 印迹分析.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
p35 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-400431
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- p35 CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在p35基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：p35: sc-518009，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
p35 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-400431 | 20 µg | $397.00 |
概述
CDK5R1 编码 p35，这是一种在神经元中富集的调节性亚基，可结合并激活细胞周期依赖性激酶 5（CDK5），从而在膜上及神经突起内对激酶活性进行时空调控。CDK5–p35 复合体通过磷酸化细胞骨架与信号蛋白，协调神经元迁移、轴突导向、突触发生以及活动依赖性的突触可塑性，并将其与调控微管和肌动蛋白动态的通路联系起来。p35 周转失衡及其向 p25 的转换可延长 CDK5 活性并扰乱蛋白稳态，从而参与神经退行性变与兴奋毒性应激等机制研究。CDK5R1 表达或 CDK5–p35 信号的改变也在癫痫、神经发育相关表型以及神经元损伤反应等背景中受到关注。
p35 CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中CDK5R1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对CDK5R1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏CDK5R1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使p35蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建CDK5R1缺失的细胞模型，用于p35信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 p35 功能至关重要的 CDK5R1 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 CDK5R1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 p35 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 p35 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 CDK5R1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 p35 HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 p35 HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由CDK5R1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定CDK5R1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。