Odf1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405840

Panoramica

ODF1 codifica la proteina 1 delle fibre dense esterne (Odf1), un componente strutturale del flagello spermatico arricchito nel testicolo, che sostiene la stabilità dell’assonema e il ritorno elastico durante il battito flagellare. Odf1 partecipa alla spermiogenesi e alle fasi tardive dell’assemblaggio dello spermatozoo, contribuendo all’organizzazione del citoscheletro e all’integrità meccanica del tratto principale. L’alterazione dell’architettura della coda dello spermatozoo dipendente da ODF1 è associata a ridotta motilità e a fenotipi di infertilità maschile, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi dell’astenozoospermia e di difetti spermatogenetici correlati. Il suo profilo di espressione ristretto e la funzione specializzata offrono un modello mirato per indagare la regolazione, dipendente dalla differenziazione, delle proteine del citoscheletro nelle cellule germinali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Odf1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ODF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ODF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ODF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Odf1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ODF1 per lo studio della segnalazione di Odf1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ODF1 critici per la funzione di Odf1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ODF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Odf1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Odf1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ODF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Odf1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Odf1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ODF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ODF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.