Plasmide Double Nickase (h) Nurr1: sc-400289-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Nurr1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Nurr1 Double Nickase (h) et le plasmide Nurr1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NR4A2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nurr1 Antibody (F-5): sc-376984
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Nurr1 | sc-400289-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Nurr1 | sc-400289-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR4A2 code Nurr1, un facteur de transcription de la famille des récepteurs nucléaires orphelins, qui régule des programmes géniques impliqués dans la différenciation neuronale, l’homéostasie mitochondriale et les réponses cellulaires au stress. Nurr1 coordonne des réseaux transcriptionnels avec d’autres récepteurs nucléaires et des co-régulateurs afin de moduler la signalisation liée à la dopamine, l’expression de gènes inflammatoires et des voies de survie. Une activité altérée de NR4A2 a été associée à une dérégulation de la signalisation neuro-immune et à un défaut de maintien des phénotypes dopaminergiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence et des dysfonctions neuronales associées à l’inflammation. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de NR4A2 permet d’explorer les mécanismes du contrôle transcriptionnel au cours du développement neural et des réponses adaptatives au stress.
Nurr1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NR4A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NR4A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NR4A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NR4A2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.