Nur77 Plasmide Double Nickase (h): sc-418320-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nur77 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nur77 Double Nickase Plasmid (h) e il Nur77 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NR4A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nur77 Antibody (C-5): sc-365113
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nur77 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nur77 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR4A1 (Nur77) è un recettore nucleare orfano e un fattore di trascrizione a risposta immediata che integra segnali mitogenici, infiammatori e di stress per riprogrammare rapidamente l’espressione genica. Opera nella segnalazione dei recettori nucleari regolando apoptosi, proliferazione, metabolismo e differenziamento delle cellule immunitarie, con effetti dipendenti dal contesto nell’attivazione/tolleranza dei linfociti T, nella polarizzazione dei macrofagi e nella biologia vascolare. L’attività di Nur77 interseca reti trascrizionali collegate a MAPK, NF-κB e PI3K/AKT, modellando i programmi citochinici e le risposte cellulari allo stress. Un’espressione o una segnalazione deregolata di NR4A1 è stata associata a disturbi infiammatori, aterosclerosi e a diversi fenotipi rilevanti per il cancro, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale e sulle decisioni di destino cellulare.
Nur77 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR4A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR4A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR4A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR4A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.