20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
Le Plasmide CRISPR d'Activation (m) Nup133 correspond à un système d'activation de la transcription par un médiateur d'activation synergique du système (SAM) spécifiquement conçu pour réguler positivement l'expression du gène
Nup133 Plasmide d'Activation CRISPR (m) est composé de trois plasmides au ratio 1:1:1 : un plasmide codant pour la nucléase Cas9 désactivée (dCas9) (D10A and N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64, et un gène de résistance à la blasticidine; un plasmide codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 et un gène de résistance à l'hygromycine; un plasmide codant pour un ARN guide spécifique de 20 nt fusionné avec deux aptamères ARN MS2, et un gène de résistance à la puromycine.
Le complexe SAM résultant se lie à une région spécifique d'un site de départ de la transcription du gène cible et fournit un recrutement accru des facteurs de transcription pour une activation hautement efficace du gène cible
Les gRNA codés par le plasmide d'activation CRISPR Nup133 (m) et le plasmide d'activation CRISPR Nup133 (m2) ciblent des régions régulatrices distinctes en amont du site de départ de la transcription de Nup133. L'un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nup133 Antibody (E-6): sc-376763