NOXA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400498-ACT

PMAIP1はNOXAをコードしており、NOXAはBCL2ファミリーに属するBH3-only型のアポトーシス促進因子で、MCL1および関連する抗アポトーシス性タンパク質を選択的に拮抗することでミトコンドリア外膜の透過化を促進します。NOXAは、p53依存的なDNA損傷応答を含む細胞ストレスシグナルによって速やかに誘導され、アポトーシスをプロテオスタシスや低酸素関連シグナル伝達と統合します。BCL2ファミリー間相互作用のバランスを変化させることで、NOXAはカスパーゼ活性化、ミトコンドリアの健全性、ならびに細胞運命の決定に影響を与えます。PMAIP1/NOXAの発現異常は、がん生物学におけるアポトーシスのプライミング状態の変化や、神経変性および炎症性状況に関連するストレス応答表現型と関連づけられています。

NOXA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PMAIP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NOXA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PMAIP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPMAIP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NOXAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPMAIP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNOXA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPMAIP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNOXA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。