NOS2/iNOS Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421928-LAC

Nos2 codifica a sintase do óxido nítrico induzível (NOS2/iNOS), uma enzona que gera óxido nítrico a partir de L-arginina durante respostas inflamatórias e da imunidade inata. O óxido nítrico derivado da iNOS modula a sinalização redox, a defesa antimicrobiana e redes de citocinas, interagindo com programas transcricionais regulados por NF-κB, JAK/STAT e MAPK em macrófagos e outros tipos celulares ativados. A atividade alterada de Nos2 é amplamente utilizada como um indicador mecanístico em modelos de inflamação, infeção e stress oxidativo, nos quais o óxido nítrico e as espécies reativas de nitrogénio influenciam o metabolismo celular, a função mitocondrial e a remodelação tecidular. A desregulação da sinalização da iNOS tem sido implicada em sistemas experimentais relevantes para autoimunidade, neuroinflamação, disfunção cardiovascular e modulação imunitária associada a tumores.

As Partículas de Ativação Lentivirais NOS2/iNOS (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Nos2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NOS2/iNOS (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Nos2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NOS2/iNOS. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Nos2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.