Partículas Lentivirales de Activación (m) NOS2/iNOS: sc-421928-LAC

Nos2 codifica la sintasa de óxido nítrico inducible (NOS2/iNOS), una enzima que genera óxido nítrico a partir de L-arginina durante las respuestas inflamatorias y de la inmunidad innata. El óxido nítrico derivado de iNOS modula la señalización redox, la defensa antimicrobiana y las redes de citocinas, e interactúa con programas transcripcionales regulados por NF-κB, JAK/STAT y MAPK en macrófagos y otros tipos celulares activados. La actividad alterada de Nos2 se utiliza ampliamente como lectura mecanística en modelos de inflamación, infección y estrés oxidativo, donde el óxido nítrico y las especies reactivas de nitrógeno influyen en el metabolismo celular, la función mitocondrial y la remodelación tisular. La señalización desregulada de iNOS se ha implicado en sistemas experimentales relevantes para la autoinmunidad, la neuroinflamación, la disfunción cardiovascular y la modulación inmunitaria asociada a tumores.

Las partículas de activación lentiviral NOS2/iNOS (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Nos2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NOS2/iNOS (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Nos2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NOS2/iNOS. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Nos2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.