Plásmido CRISPR de Activación (h) NOD2: sc-400668-ACT

El NOD2 humano (proteína 2 con dominio de oligomerización de unión a nucleótidos) es un receptor citosólico de reconocimiento de patrones que detecta fragmentos de peptidoglicano bacteriano, como el dipéptido muramil, e inicia la señalización de la inmunidad innata. Tras su activación, NOD2 interactúa con RIPK2 para estimular las vías de NF-κB y MAPK, modulando la expresión de genes inflamatorios, las respuestas antimicrobianas y la homeostasis de la barrera epitelial. NOD2 también se vincula con procesos relacionados con la autofagia y con el reconocimiento microbiano en células mieloides y en células epiteliales intestinales. Las alteraciones genéticas y funcionales de la señalización de NOD2 se asocian con interacciones huésped–microbio desreguladas y fenotipos inflamatorios, lo que respalda su estudio en modelos de inmunidad mucosa e inflamación asociada a infecciones.

NOD2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NOD2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NOD2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NOD2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NOD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NOD2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NOD2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NOD2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NOD2 en células tumorales con expresión de NOD2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.