NKp44 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407295

Übersicht

NCR2 kodiert NKp44 (CD336), einen aktivierenden Rezeptor natürlicher Killerzellen (NK-Zellen), der nach Aktivierung der NK-Zellen induziert wird und über die Assoziation mit dem ITAM-tragenden Adapter TYROBP (DAP12) signalisiert. Die Bindung von NKp44 an zelluläre oder pathogenenassoziierte Liganden fördert die Degranulation von NK-Zellen und die Zytokinsekretion und ist damit in die angeborene Immunüberwachung eingebunden, die zytotoxische Antworten mitprägt. Die Expression von NCR2 und die durch NKp44 vermittelte Signalübertragung wurden im Kontext von Immunfehlregulation untersucht, unter anderem in entzündlichen Mikroumgebungen sowie bei veränderter NK-Zell-Funktion in Krebs- und chronischen Infektionssituationen. Als Oberflächenrezeptor mit induzierbarer Expression wird NKp44 zudem genutzt, um Aktivierungszustände von NK-Zellen zu charakterisieren und das Zusammenspiel (Cross-talk) mit anderen NK-Rezeptoren zu untersuchen.

Das NKp44 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NCR2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NCR2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NCR2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NKp44-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NCR2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NKp44-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NCR2-Exone abzielen, die für die NKp44-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NCR2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NKp44 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NKp44 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NCR2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NKp44 HDR-Plasmid (h) und NKp44 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NCR2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NCR2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.