NK 2B4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421915

Panoramica

Cd244 codifica NK 2B4 (CD244), un immunorecettore della famiglia SLAM espresso sulle cellule natural killer murine e su sottopopolazioni di cellule T, che modula la citotossicità e la produzione di citochine attraverso interazioni con CD48. La segnalazione è mediata da motivi ITSM citoplasmatici che reclutano proteine adattatrici come SAP/SH2D1A o EAT-2, plasmando reti di fosforilazione a valle che bilanciano gli output attivanti rispetto a quelli inibitori. Attraverso queste vie, CD244 contribuisce alla formazione della sinapsi immunologica, al riconoscimento delle cellule bersaglio e alla regolazione delle risposte infiammatorie. Alterazioni della segnalazione di CD244 sono state collegate a una risposta antivirale e antitumorale deregolata, all’esaurimento funzionale delle cellule NK e a uno squilibrio immunitario in contesti di infiammazione cronica e in modelli di neoplasie ematologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NK 2B4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd244 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd244 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd244 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NK 2B4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd244 per lo studio della segnalazione di NK 2B4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd244 critici per la funzione di NK 2B4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd244 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NK 2B4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NK 2B4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd244. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NK 2B4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NK 2B4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd244 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd244 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.