Plasmide Double Nickase (m) Nidogen: sc-421895-NIC

Le gène murin **Nid1** code la nidogène (entactine), une glycoprotéine sulfatée de la membrane basale qui fait le lien entre les réseaux de laminine et de collagène de type IV afin de stabiliser l’architecture de la matrice extracellulaire. La nidogène favorise l’adhésion cellule–matrice, la migration et la mécanotransduction en organisant les assemblages protéiques de la membrane basale et en modulant la signalisation associée aux intégrines ainsi que la morphogenèse tissulaire. L’intégrité de la matrice dépendante de **Nid1** est pertinente pour l’étude de la fonction de barrière vasculaire et épithéliale, de l’organisation de la jonction neuromusculaire et du développement des organes, où des défauts de la membrane basale peuvent modifier la différenciation et l’homéostasie tissulaire. Les matrices contenant de la nidogène, lorsqu’elles sont dérégulées, sont fréquemment étudiées dans des modèles de fibrose, de remodelage du microenvironnement tumoral et de lésions inflammatoires, en tant que déterminants de niches tissulaires permissives ou restrictives.

Nidogen Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nid1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nid1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nid1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nid1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.